የፍሎረሰንስ ማጣሪያ በፍሎረሰንት ማይክሮስኮፕ ውስጥ አስፈላጊ አካል ነው። የተለመደው ስርዓት ሶስት መሰረታዊ ማጣሪያዎች አሉት-የማነቃቂያ ማጣሪያ, የልቀት ማጣሪያ እና ዳይክሮክ መስታወት. ቡድኑ በአንድ ላይ ወደ ማይክሮስኮፕ እንዲገባ በተለምዶ በአንድ ኪዩብ ውስጥ የታሸጉ ናቸው።
የፍሎረሰንት ማጣሪያ እንዴት ይሠራል?
አነቃቂ ማጣሪያ
አነቃቂ ማጣሪያዎች የአንድ የተወሰነ የሞገድ ርዝመት ብርሃን ያስተላልፋሉ እና ሌሎች የሞገድ ርዝመቶችን ያግዳሉ። አንድ ቀለም ብቻ ለመፍቀድ ማጣሪያውን በማስተካከል የተለያዩ ቀለሞችን ለማምረት ሊያገለግሉ ይችላሉ. የማነቃቂያ ማጣሪያዎቹ በሁለት ዋና ዋና ዓይነቶች ይመጣሉ - ረጅም ማለፊያ ማጣሪያዎች እና የባንድ ማለፊያ ማጣሪያዎች። አነቃቂው ብዙውን ጊዜ በፍሎረሰንት የሚይዘውን የሞገድ ርዝመት ብቻ የሚያልፍ የባንድፓስ ማጣሪያ ሲሆን ይህም የሌሎች የፍሎረሰንስ ምንጮችን መነሳሳትን ይቀንሳል እና በፍሎረሰንስ ልቀት ባንድ ውስጥ ያለውን አነቃቂ ብርሃን ይከላከላል። በሥዕሉ ላይ ባለው ሰማያዊ መስመር ላይ እንደሚታየው, BP 460-495 ነው, ይህም ማለት በ 460-495nm ፍሎረሰንት ውስጥ ብቻ ማለፍ ይችላል.
በፍሎረሰንስ ማይክሮስኮፕ አብርኆት መንገድ ውስጥ ተቀምጧል እና ከፍሎሮፎር አነቃቂ ክልል በስተቀር ሁሉንም የብርሃን ምንጮችን የሞገድ ርዝመት ያጣራል። የማጣሪያው ዝቅተኛ ስርጭት የምስሎችን ብሩህነት እና ብሩህነት ያሳያል። ለማንኛውም የማነቃቂያ ማጣሪያ ቢያንስ 40% ማስተላለፍ ይመከራል ስለዚህ ስርጭቱ በጣም ጥሩ > 85% ነው። የፍላጎት ማጣሪያው የመተላለፊያ ይዘት ሙሉ በሙሉ በፍሎሮፎር ማነቃቂያ ክልል ውስጥ መሆን አለበት ፣ ስለሆነም የማጣሪያው የመሃል ሞገድ ርዝመት (CWL) በተቻለ መጠን ከፍሎሮፎሬው ከፍተኛ የማነቃቃት የሞገድ ርዝመት ጋር ቅርብ ነው። የ excitation ማጣሪያ ኦፕቲካል ጥግግት (OD) የበስተጀርባ ምስል ጨለማ ያዛል; ኦዲ (OD) ማጣሪያ ከስርጭት ክልል ወይም የመተላለፊያ ይዘት ውጭ የሞገድ ርዝመቶችን ምን ያህል በጥሩ ሁኔታ እንደሚዘጋ የሚያመለክት ነው። ቢያንስ 3.0 OD ይመከራል ነገር ግን OD 6.0 ወይም ከዚያ በላይ ተስማሚ ነው።
ልቀት ማጣሪያ
የልቀት ማጣሪያዎች ከናሙናው ውስጥ ተፈላጊው ፍሎረሰንት ወደ ጠቋሚው እንዲደርስ ለመፍቀድ ዓላማ ያገለግላሉ። አጠር ያሉ የሞገድ ርዝመቶችን ያግዳሉ እና ረዘም ላለ የሞገድ ርዝመቶች ከፍተኛ ስርጭት አላቸው። የማጣሪያው አይነት ከቁጥር ጋር የተቆራኘ ነው፡ ለምሳሌ BA510IF በሥዕሉ ላይ (የጣልቃ ገብነት ማገጃ ማጣሪያ) ይህ ስያሜ የሚያመለክተው ከፍተኛውን ስርጭት 50% የሞገድ ርዝመት ነው።
ለአነቃቂ ማጣሪያዎች ተመሳሳይ ምክሮች ለልቀቶች ማጣሪያዎች እውነት ናቸው፡ አነስተኛ ስርጭት፣ የመተላለፊያ ይዘት፣ OD እና CWL። የልቀት ማጣሪያ ከምርጥ CWL፣ አነስተኛ ስርጭት እና ኦዲ ጥምረት ጋር በተቻለ መጠን ብሩህ ሊሆኑ የሚችሉ ምስሎችን ያቀርባል፣ በተቻለ መጠን ጥልቅ እገዳ እና በጣም ደካማ የልቀት ምልክቶችን መለየት ያረጋግጣል።
Dichroic መስታወት
የዲክሮይክ መስታወት በኤክሳይቴሽን ማጣሪያ እና በልቀቶች ማጣሪያ መካከል በ45° አንግል ላይ ተቀምጧል እና የመልቀቂያ ምልክቱን ወደ ፈላጊው በማስተላለፍ ላይ እያለ ወደ ፍሎሮፎሩ የሚወስደውን የግንዛቤ ምልክት ያንፀባርቃል። በጣም ጥሩው የዲክሮቲክ ማጣሪያዎች እና የጨረር ማከፋፈያዎች በከፍተኛው ነጸብራቅ እና ከፍተኛ ስርጭት መካከል ሹል ሽግግሮች አሏቸው ፣ ከ>95% ነጸብራቅ ለአነቃቂ ማጣሪያ የመተላለፊያ ይዘት እና> 90% ለልቀቶች ማጣሪያ የመተላለፊያ ይዘት። የባዘነውን ብርሃን ለመቀነስ እና የፍሎረሰንት ምስል ሲግናል-ወደ-ጫጫታ ሬሾን ከፍ ለማድረግ የፍሎሮፎሩን መገናኛ የሞገድ ርዝመት (λ) ግምት ውስጥ በማስገባት ማጣሪያውን ይምረጡ።
በዚህ ምስል ውስጥ ያለው ዲክሮይክ መስታወት ዲ ኤም 505 ነው ፣ ስሙም 505 ናኖሜትሮች ለዚህ መስታወት ከፍተኛው ስርጭት 50% የሞገድ ርዝመት ነው። የዚህ መስተዋቱ የማስተላለፊያ ከርቭ ከ505 nm በላይ ከፍተኛ ስርጭት፣ በስተግራ 505 ናኖሜትር የሚተላለፈው ገደላማ ጠብታ፣ እና ከፍተኛው አንጸባራቂ ወደ 505 ናኖሜትር በስተግራ ቢሆንም አሁንም የተወሰነ ስርጭት ከ505 nm በታች ሊኖረው ይችላል።
በረጅም ማለፊያ እና ባንድ ማለፊያ ማጣሪያዎች መካከል ያለው ልዩነት ምንድን ነው?
የፍሎረሰንት ማጣሪያዎች በሁለት ዓይነቶች ሊከፈሉ ይችላሉ-ረጅም ማለፊያ (LP) እና ባንድ ማለፊያ (BP)።
ረጅም ማለፊያ ማጣሪያዎች ረጅም የሞገድ ርዝመቶችን ያስተላልፋሉ እና አጭጮቹን ያግዳሉ። የተቆረጠው የሞገድ ርዝመት በ 50% የከፍተኛ ማስተላለፊያ ዋጋ ነው, እና ከተቆረጠው በላይ ያሉት ሁሉም የሞገድ ርዝመቶች በረጅም ማለፊያ ማጣሪያዎች ይተላለፋሉ. ብዙውን ጊዜ በዲክሮቲክ መስተዋቶች እና የልቀት ማጣሪያዎች ውስጥ ጥቅም ላይ ይውላሉ. የሎንግፓስ ማጣሪያዎች አፕሊኬሽኑ ከፍተኛውን የልቀት ክምችት በሚፈልግበት ጊዜ እና ልዩ ልዩ መድልዎ የማይፈለግ ወይም አስፈላጊ በማይሆንበት ጊዜ ጥቅም ላይ መዋል አለበት ይህም በአጠቃላይ በአንጻራዊ ሁኔታ ዝቅተኛ የጀርባ ራስ-ፍሎረሰንት ደረጃ ባላቸው ናሙናዎች ውስጥ አንድ ነጠላ የሚለቁ ዝርያዎችን የሚያመነጩ ናቸው.
የባንድ ማለፊያ ማጣሪያዎች የተወሰነ የሞገድ ርዝመት ባንድ ብቻ ያስተላልፋሉ እና ሌሎችን ያግዳሉ። በጣም ጠንካራው የፍሎሮፎር ልቀት ስፔክትረም እንዲተላለፍ በመፍቀድ የመስቀለኛ ንግግርን ይቀንሳሉ፣ የራስ-ፍሎረሰንት ድምጽን ይቀንሳሉ እና በዚህም ረጅም የማለፍ ማጣሪያዎች ሊያቀርቡ የማይችሉትን በከፍተኛ ዳራ አውቶፍሎረሰንት ናሙናዎች ውስጥ የምልክት-ወደ-ጫጫታ ሬሾን ያሻሽላሉ።
BestScope ምን ያህል የፍሎረሰንስ ማጣሪያ ስብስቦችን ማቅረብ ይችላል?
አንዳንድ የተለመዱ የማጣሪያ ዓይነቶች ሰማያዊ፣ አረንጓዴ እና አልትራቫዮሌት ማጣሪያዎችን ያካትታሉ። በሰንጠረዡ ላይ እንደሚታየው.
| የማጣሪያ አዘጋጅ | አነቃቂ ማጣሪያ | Dichroic መስታወት | ባሪየር ማጣሪያ | የ LED መብራት የሞገድ ርዝመት | መተግበሪያ |
| B | BP460-495 | DM505 | ቢኤ510 | 485 nm | · FITC፡ የፍሎረሰንት ፀረ እንግዳ አካል ዘዴ · አሲድ ብርቱካን፡ ዲ ኤን ኤ፣ አር ኤን ኤ · ኦውራሚን፡ ቲዩበርክል ባሲለስ · EGFP, S657, RSGFP |
| G | BP510-550 | DM570 | ቢኤ575 | 535 nm | · ሮዳሚን, TRITC: የፍሎረሰንት ፀረ እንግዳ አካላት ዘዴ · ፕሮፒዲየም አዮዳይድ፡ ዲኤንኤ · አርኤፍፒ |
| U | BP330-385 | DM410 | BA420 | 365 nm | · ራስ-ፍሎረሰንት ምልከታ · DAPI: የዲኤንኤ ቀለም · Hoechest 332528, 33342: ለ Chromosome ማቅለሚያ ጥቅም ላይ ይውላል |
| V | BP400-410 | ዲኤም455 | BA460 | 405 nm | · ካቴኮላሚንስ · 5-hydroxy tryptamine ቴትራክሳይክሊን: አጽም, ጥርስ |
| R | BP620-650 | DM660 | BA670-750 | 640 nm | · ሳይ5 አሌክሳ ፍሉር 633፣ አሌክሳ ፍሉር 647 |
በ fluorescence ግዢዎች ውስጥ ጥቅም ላይ የሚውሉ የማጣሪያ ስብስቦች በፍሎረሰንስ አፕሊኬሽኖች ውስጥ ጥቅም ላይ በሚውሉት ዋና የሞገድ ርዝመቶች ዙሪያ የተነደፉ ናቸው, ይህም በጣም ጥቅም ላይ በሚውሉት ፍሎሮፎሮች ዙሪያ የተመሰረተ ነው. በዚህ ምክንያት፣ እንዲሁም ለምስል ለመቅረጽ በታቀዱት ፍሎሮፎር ስም ተሰይመዋል፣ ለምሳሌ DAPI (ሰማያዊ)፣ FITC (አረንጓዴ) ወይም TRITC (ቀይ) የማጣሪያ ኩቦች።
| የማጣሪያ አዘጋጅ | አነቃቂ ማጣሪያ | Dichroic መስታወት | ባሪየር ማጣሪያ | የ LED መብራት የሞገድ ርዝመት |
| FITC | BP460-495 | DM505 | BA510-550 | 485 nm |
| DAPI | BP360-390 | DM415 | BA435-485 | 365 nm |
| TRITC | BP528-553 | DM565 | BA578-633 | 535 nm |
| FL-Auramine | ቢፒ470 | DM480 | BA485 | 450 nm |
| ቴክሳስ ቀይ | BP540-580 | DM595 | BA600-660 | 560 nm |
| mCherry | BP542-582 | DM593 | BA605-675 | 560 nm |
የፍሎረሰንት ማጣሪያ እንዴት እንደሚመርጡ?
1. የፍሎረሰንት ማጣሪያን የመምረጥ መርህ በተቻለ መጠን የፍሎረሰንስ / ልቀትን ብርሃን በምስል መጨረሻ በኩል እንዲያልፍ ማድረግ እና ከፍተኛውን የሲግናል-ወደ-ጫጫታ ሬሾን ለማግኘት በተመሳሳይ ጊዜ የፍላሽ ብርሃንን ሙሉ በሙሉ ማገድ ነው። በተለይ የባለብዙ ፎቶን ማነቃቂያ እና አጠቃላይ የውስጥ ነጸብራቅ ማይክሮስኮፕን ለመተግበር ደካማው ድምጽ በምስል ተፅእኖ ላይ ከፍተኛ ጣልቃገብነት ያስከትላል ፣ ስለሆነም የምልክት እና የድምፅ ሬሾ አስፈላጊነት ከፍ ያለ ነው።
2. የፍሎሮፎሬውን አበረታች እና ልቀት መጠን ይወቁ። ጥቁር ዳራ ያለው ከፍተኛ ጥራት ያለው ከፍተኛ ንፅፅር ምስል የሚያመነጭ የፍሎረሰንት ማጣሪያ ስብስብ ለመገንባት አበረታች እና ልቀት ማጣሪያዎች ከፍሎሮፎር አነቃቂ ጫፎች ወይም ልቀቶች ጋር በሚዛመዱ ክልሎች ላይ በትንሹ የፓስ ባንዶች ከፍተኛ ስርጭት ማሳካት አለባቸው።
3. የፍሎረሰንት ማጣሪያዎችን ዘላቂነት ግምት ውስጥ ያስገቡ. እነዚህ ማጣሪያዎች ወደ “ማቃጠል” የሚያመሩ አልትራቫዮሌት (UV) ብርሃንን የሚያመነጩ ኃይለኛ የብርሃን ምንጮችን የማያስተጓጉሉ መሆን አለባቸው፣በተለይም የኤክሳይተር ማጣሪያው ሙሉ ለሙሉ የመብራት ምንጭ ስለሚሰራ።
የተለያዩ የፍሎረሰንት ናሙና ምስሎች
ሀብቶቹ በበይነ መረብ ላይ ተሰብስበዋል እና ተደራጅተዋል, እና ለመማር እና ለግንኙነት ብቻ ጥቅም ላይ ይውላሉ. ማንኛውም ጥሰት ካለ, ለመሰረዝ እባክዎ ያነጋግሩን.
የልጥፍ ሰዓት፡- ዲሴ-09-2022